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其原理是在一組混合的細胞群中,加入特異的針對特定靶細胞表面分子的熒光標記單克隆抗體,這種特異單克隆抗體與其對應的抗原靶分子結合,結合后的熒光標記抗體停留在特定細胞的表面,稱為熒光抗體標記的靶細胞;將含有被標記細胞的混合細胞群混懸在一定容積的上樣緩沖液中,再通過FACS的進樣吸管孔,儀器就會將細胞懸液制成以單細胞排列的微細流束。
當每一個細胞通過儀器的激光束照射時,帶在細胞上的熒光就會被相應的激光束激活并發(fā)出對應的熒光,通過敏感的光電倍增管即可檢測到從細胞表面發(fā)出的熒光。根據(jù)測得的散射光(scatteredlight)可得到細胞大小及顆粒狀態(tài)的信息;而從熒光的發(fā)射強度(fluorescenceemissions)則提供了結合在細胞上的抗體信息,進而也被反映了該細胞表面相應分子的表達情況。
在流式細胞儀分離裝置中,返回到計算機的信號,可用來產(chǎn)生一種電荷,這種電荷以特定準確的時間通過FACS的吸管孔,在與吸管孔的液體流相相遇時,可將液體流打碎成只含一個細胞的微滴。含有電荷的微滴就會從主液體流中偏移,穿過一雙極板。帶正電荷的微滴被吸引至陰極,而帶負電荷的被吸引至陽極。以這種方式,特定的細胞亞群由于標記著不同的熒光抗體而帶有不同的電荷,從而將目的細胞從混合的細胞群中分揀出來。
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