互聯(lián)網(wǎng)藥品信息證書編號(hào):(蘇)-經(jīng)營(yíng)性-2020-0005 增值電信業(yè)務(wù)經(jīng)營(yíng)許可證編號(hào):
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1.開始運(yùn)行儀器
打開電腦,打開定量PCR儀底座開關(guān)啟動(dòng)CFX Manager軟件。
2.放置樣品
將PCR反應(yīng)體系加入到0.2ml低緣八聯(lián)管,蓋上管蓋;或加入低緣96孔板,用光學(xué)級(jí)封膜封好。注意,必須帶一次性塑料手套,不要讓手指接觸到反應(yīng)管表面。將反應(yīng)管按順序放入儀器的加熱孔中。
3.設(shè)置程序,運(yùn)行實(shí)驗(yàn)
定量PCR軟件操作基本步驟為:
a.設(shè)置熱循環(huán)程序文件(Protocol Tab),點(diǎn)擊Edit(編輯)或Create New(創(chuàng)建新程序)。
b.設(shè)置反應(yīng)板文件(Plate Tab),選擇本次實(shí)驗(yàn)所要使用的熒光染料種類;單擊樣品類型;如要某些反應(yīng)孔第一熒光染料對(duì)應(yīng)的樣品類型為標(biāo)準(zhǔn)品(Standard),點(diǎn)擊“Dilution Series”鍵可設(shè)置其標(biāo)準(zhǔn)品濃度及稀釋倍數(shù)。。
c.點(diǎn)擊“Start Run”鍵,單擊open lid(打開熱蓋)或Close lid(關(guān)閉熱蓋)放置樣品;單擊Start Run,保存文件,開始運(yùn)行程序。
4.結(jié)果分析
PCR反應(yīng)結(jié)束后,軟件會(huì)自動(dòng)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線和Ct值等。如需進(jìn)行表達(dá)量分析、等位基因分析等,在軟件窗口選擇相應(yīng)分析功能。點(diǎn)擊右上方的“Report”鍵,還可輸出結(jié)果報(bào)告單。
5.關(guān)閉運(yùn)行儀器
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取出反應(yīng)管,順序關(guān)閉CFX Manager軟件、定量PCR儀電源,關(guān)閉電腦。

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