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化學發(fā)光免疫分析技術又稱為微量倍增技術,包括兩種方法:
競爭法:多用于測定小分子抗原物質。用過量包被磁顆粒的抗體,與待測的抗原和定量的標記吖啶酯抗原同時加入反應杯溫育,使標記抗原與抗體(或待測抗原與抗體)結合形成復合物。
夾心法:多用于測定大分子的抗原物質。標記抗體與被測抗原同時與包被抗體結合,生成包被抗體-測定抗原發(fā)光抗體的復合物。儀器利用某些化學基團標記在抗原或抗體上,該化學基團被氧化后形成激發(fā)態(tài),在返回基態(tài)的過程中釋放出一定波長的光子,光電倍增管將接受到的光能轉變?yōu)殡娔?,以?shù)字形式反映光量度,再計算測定物的濃度。
2.全自動微粒子化學發(fā)光免疫分析儀
應用經(jīng)典的免疫學原理,采用單克隆抗體試劑,以磁性微粒作為固相載體,堿性磷酸酶為標物,發(fā)光劑采用3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯-1,2-二氧雜環(huán)丁烷(AMPPD),小分子物質采用競爭法或抗體捕獲法進行測定,而大分子物質采用夾心法行測定。
將待測標本與包被抗體的順磁性微粒和發(fā)光劑標記的抗體混合在反應杯中共同溫育,形成性微珠包被抗體-抗原-發(fā)光劑標記抗體復合物。當磁性微粒流經(jīng)電極表面時,被安裝在電極下的磁鐵吸引住,而游離的發(fā)光劑標記抗體被緩沖液沖洗走。同時在電極加電壓,使發(fā)光標記物三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)3]2+在電極表面進行電子轉移,產(chǎn)生電化學發(fā)光,光的強度與待測抗原的濃度成正比。抑制免疫法用于小分子量蛋白質抗原檢測;夾心免疫法用于大分子量物質檢測。
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