化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析又稱化學(xué)發(fā)光免疫分析(CL IA),是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的免疫分析方法。化學(xué)發(fā)光免疫分析儀包含兩個部分，即免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)?；瘜W(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個激發(fā)態(tài)的中間體，當(dāng)這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時，同時發(fā)射出光子(hM),利用發(fā)光信號測量儀器測量光量子產(chǎn)額。免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)（在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體）直接標(biāo)記在抗原（化學(xué)發(fā)光免疫分析）或抗體（免疫化學(xué)發(fā)光分析）上，或酶作用于發(fā)光底物。

1、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析法

化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析又稱化學(xué)發(fā)光免疫分析(CL IA),是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)有吖啶酯類化合物——acridin ium ester(A E),是有效的發(fā)光標(biāo)記物[3],其通過起動發(fā)光試劑(N aOH2H2O 2)作用而發(fā)光,強(qiáng)烈的直接發(fā)光在一秒鐘內(nèi)完成,為快速的閃爍發(fā)光(見圖1)。吖啶酯作為標(biāo)記物用于免疫分析,其化學(xué)反應(yīng)簡單、快速、無須催化劑;檢測小分子抗原采用競爭法,大分子抗原則采用夾心法,非特異性結(jié)合少,本底低;與大分子的結(jié)合不會減小所產(chǎn)生的光量,從而增加靈敏度。

2、發(fā)光酶免疫分析法

從標(biāo)記免疫分析角度,化學(xué)發(fā)光酶免疫分析(chem ilum inescen t enzym e imm unoassay,CL E IA),應(yīng)屬酶免疫分析,只是酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑,操作步驟與酶免分析完全相同[5]:以酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)(如酶標(biāo)記的抗原或抗體)進(jìn)行免疫反應(yīng),免疫反應(yīng)復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物,在信號試劑作用下發(fā)光,用發(fā)光信號測定儀進(jìn)行發(fā)光測定。目前常用的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AL P),它們有各自的發(fā)光底物。

1979年，芬蘭Wallac公司研發(fā)部的Soini和Hemmila首次提出了建立稀土離子標(biāo)記物的“時間分辨熒光免疫分析”理論。

1983年，Soini和Kojola首先開發(fā)出以鑭系元素為示蹤物的時間分辨熒光測量儀，建立了新的非放射性微量分析檢測技術(shù)。同一年，Pettersson等人運用此儀器首次對人絨膜促性腺激素（hCG）進(jìn)行了時間分辨熒光免疫分析。

1984年，Hemmila確定了DELFIA（解離增強(qiáng)鑭系元素?zé)晒饷庖邫z測）這種時間分辨免疫分析技術(shù)方案，從而使DELFIA成為Wallac的專利技術(shù)。

1988年，加拿大CyberFluor公司的Diamandis創(chuàng)立了一種不同于DELFIA的時間分辨熒光免疫分析，即FIAgen（采用的是以Eu3+螯合物配基BCPDA為標(biāo)記物，通過檢測其與過量Eu3+形成的螯合物熒光進(jìn)行定量）。

我國起步相對晚一些，在2003年，時間分辨熒光分析技術(shù)獲得國家科技進(jìn)步二等獎。

免疫分析儀適用范圍該產(chǎn)品使用VITROS試劑采用體外定量、半定量及定量測量的方法對臨床生化、免疫項目進(jìn)行檢測。

SMCTM技術(shù)在獲得最優(yōu)化的免疫檢測效力的同時，操作流程其實相當(dāng)簡便，與傳統(tǒng)的ELISA很相似，通過整合獨特的洗脫步驟和靈敏的數(shù)字化檢測，SMCTM技術(shù)相較于傳統(tǒng)免疫檢測技術(shù)，信噪比有了很顯著的改善，使得我們可以在一個系統(tǒng)里同時檢測低表達(dá)和高表達(dá)的蛋白靶標(biāo)。

優(yōu)點：使用鑭系元素作為標(biāo)記物，其在保證檢測的靈敏度和特異性的基礎(chǔ)上，通過時間分辨技術(shù)消除了背景熒光的干擾。檢測多種抗原時可使用多種熒光素進(jìn)行標(biāo)記抗體，且靈敏度（標(biāo)記物為Eu3+的檢測靈敏度為10-18mol/well）和特異性均較高，較其他分析方法好。還有標(biāo)準(zhǔn)曲線劑量范圍寬、自動化程度高、操作簡便等許多優(yōu)點。

缺點：試劑盒昂貴和易受內(nèi)源性或外源性稀土離子的污染

1.使用環(huán)境：將儀器置于水平、穩(wěn)固、潔凈的地方。自然環(huán)境中稀土離子存在十分廣泛，如空氣灰塵和煙霧中，均有不同程度的含量，尤以北方地區(qū)為甚，所以應(yīng)建立一個相對無塵的操作環(huán)境，防止器材、試劑和操作者在操作中不慎可能造成的污染。

2.操作時按照實驗室安全工作準(zhǔn)則，戴手套穿工作服，不得戴首飾，以避免潛在的危險；在實驗中應(yīng)該注意用電安全，不得觸及帶電部分；標(biāo)本及其他廢棄物的處理應(yīng)遵守實驗室相關(guān)規(guī)定，注意生物安全。

3.嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，如儀器出現(xiàn)故障，立即向管理責(zé)任人或科室負(fù)責(zé)人報告，查明原因，及時處理，不得擅自“修理”，應(yīng)登記“儀器設(shè)備使用登記”本。

4.當(dāng)儀器不處于STANDBY或關(guān)機(jī)狀態(tài)時，不能觸及加樣針、攪拌棒等儀器運動部分。

5.將血清標(biāo)本吸入樣品杯時，避免產(chǎn)生氣泡或吸入凝塊。

6.銪標(biāo)記物是提高靈敏度、降低非特異性結(jié)合的關(guān)鍵，受標(biāo)記方法、抗體濃度、稀土元素或其螯合物質(zhì)量及標(biāo)記中帶來不均一性影響，每批標(biāo)記物質(zhì)量都有一定的差異，因此不同批號標(biāo)記物敏感性不一，不能混用，且每次測定都需作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

7.時間分辨熒光免疫分析技術(shù)的免疫反應(yīng)與其他免疫反應(yīng)的條件一樣，易受pH、溫度、時間等因素的影響。且TRFIA的免疫反應(yīng)是在室溫狀態(tài)下不斷振蕩完成的，所以反應(yīng)的室溫等環(huán)境影響因素應(yīng)嚴(yán)格控制。

8.TRFIA技術(shù)由于靈敏度極高，許多因素能夠影響其準(zhǔn)確度，因此在每一步的操作中都應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行操作。