生物指示劑的定義：

對(duì)特定滅菌處理有確定的抗力，并裝在內(nèi)層包裝中可供使用的染菌載體。用于確認(rèn)滅菌設(shè)備的性能，滅菌程序的驗(yàn)證,生產(chǎn)過(guò)程滅菌效果的監(jiān)控等。

生物指示劑分類：

1）按結(jié)構(gòu)分可分為片狀生物指示劑(strip biological indicator)和自含式生物指示劑(self-contained biological indicator)；片狀生物指示劑需要使用陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，而自含式生物指示劑只需要陽(yáng)性對(duì)照即可[1] 。

2）根據(jù)ISO 11138 -1(2006)的分類，目前的生物指示劑有環(huán)氧乙烷滅菌用生物指示物、濕熱滅菌用生物指示物、干熱滅菌用生物指示物、過(guò)氧化氫低溫等離子滅菌生物指示物和甲醛滅菌用生物指示物[2] 。

3）按培養(yǎng)時(shí)間可分為通用型生物指示劑和快速型生物指示劑。通用型生物指示劑根據(jù)芽孢復(fù)蘇后指示菌種新陳代謝引起培養(yǎng)液pH值改變，通過(guò)酸堿指示劑變色來(lái)進(jìn)行判讀，時(shí)間一般在24或48小時(shí)以上；而快速型生物指示劑根據(jù)芽孢復(fù)蘇后的酶促反應(yīng)，通過(guò)熒光進(jìn)行判讀，時(shí)間一般為3-4小時(shí)。同時(shí)國(guó)外正在研發(fā)更加快速的生物指示劑，有望在1小時(shí)之內(nèi)得出結(jié)果。

生物指示劑重量質(zhì)量特性：

1）芽孢含量

2）D值（生存曲線法測(cè)定）

在滅菌程序驗(yàn)證中，盡管可通過(guò)滅菌過(guò)程某些參數(shù)的監(jiān)控來(lái)評(píng)估滅菌效果，但生物指示劑的被滅殺程度，則是評(píng)價(jià)一個(gè)滅菌程序有效性最直觀的的指標(biāo)?？墒褂檬惺鄣臉?biāo)準(zhǔn)生物指示劑，也可使用有日常生產(chǎn)污染菌監(jiān)控中分離的耐受性最強(qiáng)的微生物制備的孢子。在生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)中，需確定孢子在實(shí)際滅菌條件下的D值，并測(cè)定孢子的純度和數(shù)量。驗(yàn)證時(shí)，生物指示劑的微生物用量應(yīng)比日常檢出的微生物污染量大，耐受性強(qiáng)，以保證滅菌程序有更大的安全性。在最終滅菌法中，生物指示劑應(yīng)放在滅菌柜的不同部位。并避免指示劑直接接觸到被滅菌物品。生物指示劑按設(shè)定的條件滅菌后取出，分別置培養(yǎng)基中培養(yǎng)，確定生物指示劑中的孢子是否被完全殺滅。

過(guò)度殺滅產(chǎn)品滅菌驗(yàn)證一般不考慮微生物污染水平，可采用市售的生物指示劑。對(duì)滅菌手段耐受性差的產(chǎn)品，設(shè)計(jì)滅菌程序時(shí)，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)預(yù)計(jì)在該生產(chǎn)工藝中產(chǎn)品微生物污染的水平，選擇生物指示劑的菌種和孢子書(shū)數(shù)量。這類產(chǎn)品的無(wú)菌保證應(yīng)通過(guò)監(jiān)控每批滅菌前的微生物污染的數(shù)量、耐受性和滅菌程序驗(yàn)證所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估。

在醫(yī)療機(jī)構(gòu)的滅菌生物監(jiān)測(cè)中，WS310國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)已明確規(guī)定：

1、壓力蒸汽滅菌過(guò)程為每周一次，使用壓力蒸汽滅菌生物指示劑；

2、環(huán)氧乙烷氣體滅菌為每批次都要監(jiān)測(cè)，使用環(huán)氧乙烷滅菌生物指示劑；

3、低溫等離子體滅菌為每日監(jiān)測(cè)一次，使用低溫等離子體滅菌生物指示劑。

以上三種滅菌方式，。也是2012年醫(yī)療機(jī)構(gòu)的主要滅菌方式，其中，壓力蒸汽滅菌使用最為廣泛。

2、干熱滅菌法：干熱滅菌法最常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子，如 NCIMB8058、ATCC9372。D值大于1.5min，每片活孢子數(shù)5*10（5）—5*10（6）個(gè)。去熱原驗(yàn)證時(shí)使用大腸桿菌內(nèi)毒素，加量不小于1000細(xì)菌內(nèi)毒素單位。

3、輻射滅菌法：輻射滅菌法最常用 的生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子，如NCTC10327、NCIM10692、ATCC27142。每片活孢子數(shù)10（5）—*10（6），置于放射劑量25kGy條件下，D值約3kGy。但應(yīng)注意滅菌產(chǎn)品中所負(fù)載的微生物可能比短小芽孢桿菌孢子顯示更強(qiáng)的抗輻射力。因此短小芽孢桿菌孢子可用于監(jiān)控滅菌過(guò)程，但不能用于滅菌輻射劑量的建立。

4、氣體滅菌法;環(huán)氧乙烷滅菌最常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子，如NCTC10073、ATCC9372。氣態(tài)過(guò)氧化氫滅菌最常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子，如NCTC10007、NCIM8157、ATCC7953。每片活孢子數(shù)1*10（5）—5*10（6）個(gè)。環(huán)氧乙烷滅菌中，枯草芽孢桿菌孢子D值大于2.5min，在環(huán)氧乙烷濃度為600mg/l，相對(duì)濕度為60%，溫度為54℃下滅菌， 60min應(yīng)被殺滅。

5、過(guò)濾除茵法：過(guò)濾除菌法最常用的生物指示劑為缺陷假單胞菌(如ATCC19146），用于濾膜孔徑為0.22um的濾器；黏質(zhì)沙雷菌（ATCC14756），用于濾膜孔徑為0.45um的濾器。